根據(jù)茶樹α-微管蛋白(α-tubulin)的mRNA全長序列(GenBank登錄號DQ340766)設(shè)計引物,以RT-PCR方法擴增茶樹α-tubulin基因,將擴增產(chǎn)物克隆到原核表達載體pET-32a(+)上,并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21trxB(DE3)中,經(jīng)異丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)后以包涵體形式表達。以純化后的α-tubulin融合蛋白制備兔多克隆抗體,用Westernblot方法檢測抗體特異性。結(jié)果顯示α-tubulin蛋白以包涵體形式大量表達,以融合蛋白制備的抗體對茶樹體內(nèi)的α-tubulin具有良好的特異性。
完成機構(gòu):安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶葉生物化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點實驗室,安徽合肥230036